分光光度計在更換、重新安裝、運輸或檢修光源燈后，以及當機器不能正常工作時，都應進行波長校準。對于正常運行的機器，還應每月檢測一次波長，必要時進行校準，以確保波長讀數與通過樣品的波長一致，并確保機器的第一靈敏度。通常使用光譜釹濾光片校準方法，適用于721型儀器可見光區域的波長校準。通常以585nm或529nm或T%處的吸收峰為標準。由于721型機器的出射光波長較寬，因此不容易分離573nm和585nm處的兩個峰值或波谷，校準過程中可能會出現誤差。因此，建議使用529nm處的峰或谷作為波長校準的標準。

分光光度計波長校準方法

校準期間，機器根據需要預熱。要求電源電壓穩定。波長被卷繞在580nm，T%被調節到頂部。在反應杯處放置一條白紙，檢查邊緣是否有光強均勻且無光暈或雜散光的斑點。如果不符合要求，調整燈泡位置使其符合要求，這是對波長校準的粗略調整。然后將靈敏度調整至1（最低檔位），將波長刻度盤對準529nm，并將儀器的機械零點調零。

當光路為空白時，將T%調整為100%T，并重復檢查零點和100%T穩定性信息。將光譜Nd濾光器插入光路中，逐漸旋轉波長盤以找到透光率最低的一個（當微旋轉波長盤向左和向右旋轉時，透光率值增加），即波長為529nm。確定波長盤的指示值是否為529nm。如果指示值為534nm，則波長誤差為5nm。

如果超過規定值（±1nm），則必須進行調整。調整方法：將波長盤對準529nm，從光路中取出光譜釹濾光片，當光路為空白時，將儀器指針調整至100%T，然后將光譜釹濾光片插入光路。打開機器左側的小蓋板，找到波長校準螺釘（左手柄長度的螺釘）；沿逆時針方向進行微調（如果存在負誤差，則為順時針方向），使儀表指針的指示器T%最低。重復測量波長誤差信息，直到其符合機器的技術規范。裝上左側的小蓋板，校準完成。